Quy trình công nghệ tách chiết ADN từ xương người cũng giống như tách chiết ADN từ mô và tế bào đều đòi hỏi phải ly giải được dòng. Vì bề mặt của xương rất rắn chắc rất khó phá tan vỡ cho nên những qui trình tách xương đòi hỏi phải nghiền nhỏ xương. Tuy nhiên, việc nghiền loại rất khó và đôi khi không khả thi, kỹ thuật công nghệ sinh học mới cho phép sử dụng các ống dùng áp lực để chiết xuất ADN từ những mảnh xương nhỏ

1. Nguyên lý tách chiết ADN

Tách chiết ADN là kỹ thuật cơ bản trong phần đông các phòng thể nghiệm phân tử, di truyền và sinh vật học nói chung. Phân tử ADN sau tách chiết cần đảm bảo được số lượng và chất lượng để đáp ứng được các phân tích sau ấy. bây giờ trên thị phần mang sẵn gần như bộ kít tách chiết ADN khá luôn thể dụng. bên cạnh đó, việc nắm rõ nguyên lý tách ADN là quan trọng để giúp chúng ta hiểu rõ hơn về cách thức thức hoạt động của bộ kít, giải quyết vấn đề lúc sở hữu lỗi sảy ra.

Nguyên lý tách chiếc

Cho đến nay đã sở hữu hầu hết thứ tự tách chiết ADN được đưa ra và Thống kê thành công bởi phổ biến nhà nghiên cứu. Đối với mỗi loại mô, tế bào quy trình tách chiết với thể sẽ khác nhau. tuy thế thì nguyên lý tách chiết ADN từ tế bào vẫn gồm các bước cơ bản sau:

+ Bước một: Phá màng

+ Bước hai: loại bỏ Protein

+ Bước 3: Tủa Nucleic Acid

2. Phương pháp tách chiết ADN truyền thống

a. Phá màng tế bào, màng nhân

Bước một: Phá màng tế bào, màng nhân: nghiền tế bào, mô trong dung dịch chất tẩy (SDS) và proteinase để phá vỡ màng tế bào, màng nhân, phóng thích ADN ra môi trường cùng lúc phân hủy các protein kết liên mang ADN.

+ Chất tẩy là phân tử lưỡng cực, sẽ hài hòa mang protein màng và các phân tử phospholipid khiến phá vỡ vạc cấu trúc màng.

+ Chất tẩy ion hóa sở hữu tác dụng phá màng mạnh, chất tẩy ko ion hóa mang tác dụng phá màng nhẹ hơn.

b. Loại bỏ Protein

Sau lúc phá vỡ tế bào, ADN sẽ được trộn lẫn mang các thành phần khác của tế bào chủ yếu là protein trong dung dịch. Việc quan trọng khi này là tách ADN ra khỏi thành phần protein của tế bào. Để thực hiện bước này người ta cốt yếu sử dụng hỗ hợp Phenol/Chloroform. Phenol-Chloroform không tan trong nước nhưng mang khả năng làm cho biến tính protein. Do đó, protein sẽ bị tủa lại lúc gặp phenol. Trong khi ấy ADN thì không bị tủa bởi phenol nên vẫn tan trong nước. lúc ly tâm phenol/Chloroform nặng sẽ lắng xuống dưới, protein tủa sẽ nằm tại danh giới của nước và phenol, còn ADN thì nằm lại trong pha nước ở phía trên. Thu pha nước cất ADN này để thực hành các bước tiếp theo.

c. Tủa Nucleic Acid

Sau bước tủa protein, ADN thu được nằm trong dung dịch với dung môi là nước. Sử dụng Ethanol hoặc Isopropanol để tủa ADN trong dung dịch. Sau đó ly tâm để thu cặn ADN. Cặn ADN này có thể được rửa trong Ethanol 70% một hoặc hai lần để làm sạch mẫu. Tiếp theo để cho bay hơi cồn và huyền dịch hóa cặn ADN thu được trong đệm.

3. Phương pháp tách chiếc ADN từ xương người

a. Khử trùng

Như bất kỳ 1 bước bắt đầu bất kỳ của các dòng tách chiết ADN, việc vô trùng dòng được thực hiện để giảm thiểu nguy cơ truyền nhiễm mẫu chéo. Bề mặt của cái xương cần được xử lý ban sơ bằng thuốc tẩy và nước đựng. không những thế gần như các phương tiện sử dụng phải được khử trùng bằng nồi hấp nhiệt. Đối sở hữu những dụng cụ to hơn mà không thể hấp vô trùng sử dụng thuốc tẩy và cồn làm cho sạch bề mặt mà dòng xúc tiếp. Pipet và những công cụ xử lý mẫu cần thao tác trong tủ hút sạch.

Ảnh minh hoạ

Những mẫu xương sau khi được khiến sạch bằng thuốc tẩy và nước cất, bề mặt ngoài của xương được mài sạch. thời kỳ này sẽ chiếc bỏ các chất lẫn bám trên bề mặt xương và giúp tiếp xúc mang một số mô xương mềm cấp thiết cho việc tách chiết ADN. các loại xương sau đó được nghiền thành bột. Cần dùng 750mg bột xương và một.6 ml dung dịch đệm phân giải. Theo một cách thức công bố trong một nghiên cứu về axit Nucleic dung dịch đệm phân giải gồm EDTA 0,1M, dung dịch muối và proteinaaseK. hẩu lốn này cho ủ qua đêm ở 370C để phân giải tối ưu mẫu xương để phóng thích ADN.phương pháp nghiện chiếc Sau khi ủ qua đêm, các dòng được ly tâm tốc độ cao để dòng bỏ những tạp chất không nhu yếu. cái bỏ cặn lắng, bổ sung thêm muối amoni acetat và tủa ADN ở pha trên trong cồn trong sáng để kết tủa ADN. giai đoạn này thực hiện và ủ hỗn hợp trong đá lạnh để tối ưu hiệu suất tủa ADN. hỗn tạp sau ấy được ly tâm, cái bỏ dịch, thu và hòa tan ADN trong nước khử ion.

b.Phương pháp không nghiền xương thành bột

Một công ty kỹ thuật sinh học sở hữu tên Pressure BioSciences Inc đã tạo ra 1 phương pháp mới để tách chiết ADN trong khoảng xương mà ko cần phải nghiền xương thành bột. cách này dùng công nghệ (PCT) chiết xuất ADN. mang công nghệ này có loại thể được sự lây nhiễm chéo thường xảy ra do sử dụng chung một máy nghiền cho các mẫu xương khác nhau. như vậy như bí quyết nghiền xương thành bột những loại xương vẫn được khử trùng nhưng sau ấy cắt thành các mảnh nhỏ khoảng 250mg để thích hợp các ống trong công nghệ tiêu dùng sức ép.